?。ㄒ唬┐姿崂w維素薄膜電泳醋酸纖維素是提纖維素的羥基乙?；纬傻睦w維素醋酸酯。電泳廠家又名—— 電著（著），泳漆，電沉積。創(chuàng)始于二十世紀(jì)六十年代，由福特汽車公司較先應(yīng)用于汽車底漆。陰極電泳它是將具有導(dǎo)電性的被涂物浸漬在裝滿水稀釋的、濃度比較低的電泳涂料槽中作為陽極（或陰極）、在槽中另設(shè)置與其相對(duì)應(yīng)的陰極（或陽極），在兩極間通直流電，在被涂物上析出均一、水不溶的涂膜的一種涂裝方法。由該物質(zhì)制成的薄膜稱為醋酸纖維素薄膜。這種薄膜對(duì)蛋白質(zhì)樣品吸附性小，幾乎能完全消除紙電泳現(xiàn)的 ;拖尾 ;現(xiàn)象，又因?yàn)槟さ挠H水性比較小，它所容納的緩沖液也少，電泳時(shí)電流(Electron flow)的大部分由樣品傳導(dǎo)，所以分離速度快，電泳時(shí)間短，樣品用量少，5μg的蛋白質(zhì)可得到滿意的分離效果。因此特別適合于病理情況下微量異常蛋白的檢測(cè)。醋酸纖維素膜經(jīng)過冰醋酸乙醇（酒精)溶液或其它透明液處理后可使膜透明化有利于對(duì)電泳圖譜的光吸收掃描測(cè)定和膜的長(zhǎng)期保存。⒈材料與試劑 醋酸纖維素膜一般使用市售商品，常用的電泳緩沖液為pH8.6的巴比妥緩沖液，濃度在0.05-0.09mol/L。⒉操作控制突出點(diǎn)⑴膜的預(yù)處理：必須于電泳前將膜片浸泡于緩沖液，浸透后，取出膜片并用濾紙吸去多余的緩沖液，不可吸得過干。⑵加樣：樣品用量依樣品濃度、本身性質(zhì)、染色方法及檢測(cè)方法等因素決定。對(duì)血清蛋白質(zhì)的常規(guī)電泳分析，每cm加樣線不超過μl，相當(dāng)于60-80μg的蛋白質(zhì)。⑶電泳：可在室溫下進(jìn)行。電壓為25V/cm，電流為0.4-0.6mA/cm寬。⑷染色：一般蛋白質(zhì)染色常使用氨基黑和麗春紅，糖蛋白用甲基苯(methylbenzene)胺藍(lán)或過碘酸-Schiff試劑，脂蛋白則用蘇丹黑或品紅亞硫（化學(xué)符號(hào)：S）酸染色。⑸脫色與透明：對(duì)水溶性染料較普遍應(yīng)用的脫色劑是5％醋酸水溶液。為了長(zhǎng)期保存或進(jìn)行光吸收掃描測(cè)定，可浸入冰醋酸：無水乙醇＝30:70（V/V）的透明液中。（二）凝膠電泳以淀粉膠、瓊脂或瓊脂糖凝膠、聚丙烯酰胺凝膠等作為支持介質(zhì)的區(qū)帶電泳法稱為凝膠電泳。其中聚丙烯酰胺凝膠電泳（polyacrylamide gel electrophoresis，PAGE）普遍用于分離蛋白質(zhì)及較小分子的核酸。瓊脂糖凝膠孔徑較大，對(duì)一般蛋白質(zhì)不起分子篩作用，但適用于分離同工酶及其亞型，大分子核酸等應(yīng)用較廣，介紹如下：⒈瓊脂糖凝膠電泳的原理概述 瓊脂糖是由瓊脂分離制備的鏈狀多糖。其結(jié)構(gòu)單元是D-半乳糖和3.6-脫水-L-半乳糖。許多瓊脂糖鏈依氫(Hydrogen)鍵及其它力的作用使其互相盤繞形成繩狀瓊脂糖束，構(gòu)成大網(wǎng)孔型凝膠。因此該凝膠適合于免疫復(fù)合物、核酸與核蛋白的分離、鑒定及純化。在臨床生化檢驗(yàn)中常用于LD
　　H、CK等同工酶的檢測(cè)。陰極電泳根據(jù)被涂物的極性和電泳涂料的種類，電泳涂裝法可分為兩種,陰極電泳涂裝法被涂物為陰極，所采用的電泳涂料是陽離子型（帶正電荷)。⒉瓊脂糖凝膠電泳分離核酸的基本技術(shù) 在一定濃度的瓊脂糖凝膠介質(zhì)中，DNA分子的電泳遷移率與其分子量的常用對(duì)數(shù)成反比；分子構(gòu)型也對(duì)遷移率有影響，如共價(jià)閉環(huán)DNA＞直線DNA＞開環(huán)雙鏈DNA。當(dāng)凝膠濃度太高時(shí)，凝膠孔徑變小，環(huán)狀DNA（球形）不能進(jìn)入膠中，相對(duì)遷移率為0，而同等大小的直線DNA（剛性棒狀）可以按長(zhǎng)軸方向前移，相對(duì)遷移率大于0。⑴設(shè)備與試劑：瓊脂糖凝膠電泳分為垂直及水平型兩種。其中水平型可制備低濃度瓊脂糖凝膠，而且制膠與加樣都比較方便，故應(yīng)用比較廣泛(extensive)。核酸分離一般用連續(xù)緩沖體系，常用的有TBE（0.08mol/L Tris·HCl，pH8.5，0.08mol/L硼酸（Boricacidhighpurity），0.0024mol/L EDTA）和THE（0.04mol/L Tris·HCl。pH7.8，0.2mol/L醋酸鈉，0.008mol/L EDTA）。⑵凝膠制備：用上述緩沖液配制0.5％-0.8％瓊脂糖凝膠溶液，沸水浴或微波爐加熱使之融化，冷至55℃時(shí)加入溴化乙錠（EB）至終濃度為0.5μg/ml，然后將其注入玻璃板或有機(jī)玻璃 (是一種通俗的名稱，縮寫為PMMA)板組合安裝好的模子中，厚度依樣品濃度而定。注膠時(shí)，梳齒下端距玻璃板0.5-.0mm，待脫凝固后，取出梳子，加入適量電極（electrode）緩沖液使板膠浸沒在緩沖液下mm處。⑶樣品制備與加樣：溶解于TBE或THE內(nèi)的樣品應(yīng)含指示染料（0.025％溴酚藍(lán)或桔黃橙）、蔗糖（0％-5％）或甘油（5％-0％），也可使用2.5％Fico Ⅱ增加比重，使樣品集中，每齒孔可加樣5-0μg。⑷電泳：一般電壓為5-5V/cm。對(duì)大分子的分離可用電壓5V/cm。電泳過程(guò chéng)較好在低溫條件下進(jìn)行。⑸樣品回收：電泳結(jié)束后在紫外燈下觀察樣品的分離情況(Condition)，對(duì)需要的DNA分子或特殊片段可從電泳后的凝膠中以不同的方法進(jìn)行回收，如電泳洗脫法：在紫外燈下切取含核酸區(qū)帶的凝膠，將其裝入透析袋（內(nèi)含適量新鮮電泳緩沖液），扎緊透析袋后，平放在水平型電泳槽兩電極之間的淺層緩沖液中，00V電泳2-3小時(shí)，然后正負(fù)電極交換，反向電泳2分鐘，使透析袋上的DNA釋放(release)出來。吸出含DNA的溶液，進(jìn)行酚抽提、乙醇（chún）（酒精)沉淀等步驟（procedure)即可完成樣品的回收。其它還有低融點(diǎn)瓊脂糖法、醋酸銨溶液浸出法、冷凍擠壓法等，但各種方法都僅僅有利于小分子量DNA片段（＜kb）的回收，隨著DNA分子量的增大，回收量顯著（striking）下降(descend)。
　　
　　
　　
　　
　　
　　
　　

• 上一篇：電泳產(chǎn)品出現(xiàn)水印問題如何解決
• 下一篇：電泳加工 的優(yōu)點(diǎn)簡(jiǎn)介